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一.血管內皮生長因子VEGF試劑盒檢測原理：

本(ben)(ben)(ben)試劑盒采用雙(shuang)抗(kang)(kang)體夾心酶(mei)聯免(mian)疫吸附檢測(ce)技術(shu)。特異性抗(kang)(kang)人IL-12p70單克隆(long)抗(kang)(kang)體預包被在(zai)(zai)高親和(he)力(li)的(de)(de)酶(mei)標(biao)板(ban)上。酶(mei)標(biao)板(ban)孔中(zhong)加(jia)入(ru)(ru)標(biao)準(zhun)品(pin)和(he)檢測(ce)樣本(ben)(ben)(ben)，經過孵育，樣本(ben)(ben)(ben)中(zhong)存(cun)在(zai)(zai)的(de)(de)IL-12p70與(yu)固相抗(kang)(kang)體結合。洗(xi)(xi)滌(di)去除未結合的(de)(de)物質后，加(jia)入(ru)(ru)生物素化的(de)(de)單克隆(long)抗(kang)(kang)體，孵育。洗(xi)(xi)滌(di)去除未結合的(de)(de)生物素抗(kang)(kang)體，加(jia)入(ru)(ru)辣根過氧化物酶(mei)標(biao)記的(de)(de)鏈霉親和(he)素（S-HRP）。洗(xi)(xi)滌(di)，加(jia)入(ru)(ru)顯色底(di)物TMB，避光(guang)顯色。終(zhong)止液終(zhong)止反(fan)應，在(zai)(zai)450 nm波長(chang)（參(can)考(kao)波長(chang)570-630 nm）測(ce)定吸光(guang)度值。顏色反(fan)應的(de)(de)深淺(qian)與(yu)樣本(ben)(ben)(ben)中(zhong)IL-1α的(de)(de)濃度成(cheng)正比。

二.血管內皮生長因子VEGF試劑盒樣本采集與貯存
細胞培養上清 沉(chen)淀之后即(ji)刻檢測, 或者分裝，-20℃貯存。避免(mian)反復凍(dong)融。

血清樣本 分(fen)離(li)管(guan)分(fen)離(li)血清(qing)。在1000 g離(li)心(xin)之前(qian)，使血樣凝集(ji)30分(fen)鐘。吸取(qu)血清(qing)樣本之后即刻檢測，或(huo)者分(fen)裝，-20℃貯存。避(bi)免反復(fu)凍(dong)融。

血漿樣本 EDTA，枸櫞酸鈉(na)或(huo)肝素抗(kang)凝收集血(xue)漿樣本(ben)。在血(xue)樣收集 30分(fen)鐘內離心收集樣本(ben)。即刻檢(jian)測，或(huo)者分(fen)裝(zhuang)，-20℃貯存。避免反(fan)復凍融。 本(ben)試(shi)劑盒可(ke)能適(shi)用于其它(ta)生物學樣本(ben)。

注意：檢(jian)測(ce)前，樣本(ben)中(zhong)可(ke)見(jian)的(de)(de)沉淀必須去除。不要(yao)使用(yong)嚴(yan)重溶血(xue)或高血(xue)脂的(de)(de)樣本(ben)。 樣本(ben)應該(gai)被分裝(zhuang)并貯存(cun)于-20℃，以(yi)避免人IL-6活(huo)性的(de)(de)丟失(shi)。如(ru)果在(zai)24小(xiao)時內檢(jian)測(ce)，樣本(ben)可(ke)以(yi)存(cun)放在(zai)2-8℃。 避免樣本(ben)的(de)(de)反復(fu)凍融。在(zai)分析前，冷凍樣本(ben)應該(gai)緩慢的(de)(de)恢(hui)復(fu)至室(shi)溫，輕柔地混勻。

三.血管內皮生長因子VEGF試劑盒檢測步驟:

1. 準備好所有需要的試劑及工作濃度標準品。 2. 將不需要的板條拆卸下來，放回裝有干燥劑的鋁箔袋，重新封好封口。 3. 300 μl洗液洗板兩次，加入300 μl洗液靜置浸泡15分鐘。為了獲得理想的實驗結果浸泡是必須的。棄掉洗液之后，在吸水紙上將微孔板拍干。洗板完成之后，請立即使用微孔板，不要讓微孔板干燥。 4. 每孔加入50 μl檢測緩沖液。 5. 加入50 μl的標準品，樣本和對照品。保證連續加樣，請不要間斷。加樣過程在15分鐘內完成。 6. 每孔加入50 μl檢測抗體。 7. 使用封板膜封板。100轉/分鐘振蕩，室溫孵育2小時。8. 棄掉液體，每孔加入300 μl洗液洗板，洗滌6次。每次洗板，在吸水紙上拍干。為獲得理想的實驗性能，必須*移除殘留液體。 9. 每孔加入100 μl辣根過氧化物酶標記的鏈霉親和素。 10. 使用新的封板膜封板。100轉/分鐘振蕩，室溫孵育45分鐘。 11. 重復步驟8。 12. 每孔加入100 μl顯色底物TMB，避光，室溫孵育10-30分鐘。 13. 每孔加入100 μl終止液。顏色由藍色變為黃色。如果顏色呈現綠色或者顏色的變化明顯不均勻，請輕輕叩擊板框，充分混勻。 14. 在30分鐘之內，酶標儀450 nm波(bo)長(chang)(chang)測(ce)定OD值(zhi)。如果能夠進(jin)行雙(shuang)波(bo)長(chang)(chang)檢測(ce)，參(can)考波(bo)長(chang)(chang)設定為570 nm或者630 nm。如果不能雙(shuang)波(bo)長(chang)(chang)檢測(ce)，請用(yong)450 nm的測(ce)定值(zhi)減去570 nm或630 nm的測(ce)定值(zhi)。僅使用(yong)450 nm測(ce)定會導(dao)致OD值(zhi)偏(pian)高，并且準確度(du)降低。