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1、IGF-1試(shi)劑盒前言說明(ming)

類胰島素生長因子1試劑盒為血清IGF-1的(de)定量檢(jian)(jian)測(ce)提(ti)供了其所需材(cai)料。此檢(jian)(jian)測(ce)試劑(ji)盒僅(jin)供提(ti)外診斷用。

2、IGF-1試劑盒臨(lin)床意(yi)義

類(lei)胰島(dao)(dao)素(su)(su)(su)生長(chang)因子(zi)(zi)-1（IGF-1）是一由70個(ge)氨基酸(suan)分(fen)(fen)子(zi)(zi)組成(cheng)的(de)(de)多(duo)(duo)肽（分(fen)(fen)子(zi)(zi)量為(wei)7650道(dao)爾頓(dun)），它(ta)(ta)是胰島(dao)(dao)素(su)(su)(su)循環過程中眾多(duo)(duo)相(xiang)關類(lei)胰島(dao)(dao)素(su)(su)(su)生長(chang)因子(zi)(zi)中的(de)(de)一種(zhong)。此分(fen)(fen)子(zi)(zi)與前(qian)胰島(dao)(dao)素(su)(su)(su)大(da)約有(you)50%的(de)(de)同源性(xing)，并且(qie)它(ta)(ta)有(you)很多(duo)(duo)與胰島(dao)(dao)素(su)(su)(su)相(xiang)似(si)的(de)(de)生物學功(gong)能(neng)。此多(duo)(duo)肽具有(you)高度的(de)(de)生長(chang)激素(su)(su)(su)（GH）依賴(lai)性(xing)，但也越來越表現出GH非依賴(lai)性(xing)分(fen)(fen)泌(mi)。IGF-1有(you)很多(duo)(duo)促(cu)進(jin)生長(chang)的(de)(de)功(gong)能(neng)，包括促(cu)進(jin)細(xi)胞(bao)分(fen)(fen)裂(lie)和軟骨(gu)的(de)(de)硫酸(suan)化,它(ta)(ta)也可(ke)顯示(shi)出骨(gu)的(de)(de)更新(xin)速度。循環中的(de)(de)IGFP-1幾乎有(you)95%以上(shang)都結合到特異性(xing)IGF結合蛋白（目前(qian)知道(dao)它(ta)(ta)有(you)六個(ge)亞種(zhong)）上(shang)。BP3是IGF-1的(de)(de)主要結合蛋白，它(ta)(ta)與IGF-1及一個(ge)酸(suan)性(xing)易變亞基一起形成(cheng)一分(fen)(fen)子(zi)(zi)量為(wei)140000道(dao)爾頓(dun)的(de)(de)三元絡合物。

3、類胰島素生長因子1試劑盒臨床應用

血清IGF-1的(de)(de)(de)檢(jian)(jian)測(ce)在(zai)小(xiao)孩生(sheng)(sheng)長紊(wen)亂(luan)及支端肥大癥(zheng)的(de)(de)(de)診斷和(he)治(zhi)療(liao)檢(jian)(jian)測(ce)中具(ju)有重要意義。IGF-1的(de)(de)(de)濃度會隨人(ren)的(de)(de)(de)年齡、營養(yang)狀(zhuang)態、身體(ti)結構(gou)和(he)生(sheng)(sheng)長激(ji)素的(de)(de)(de)分泌而發生(sheng)(sheng)變化。IGF-1的(de)(de)(de)檢(jian)(jian)測(ce)有利(li)于身材矮(ai)小(xiao)兒童(tong)的(de)(de)(de)評(ping)價和(he)惡性疾病(bing)病(bing)人(ren)的(de)(de)(de)營養(yang)學(xue)研究。在(zai)支端肥大癥(zheng)的(de)(de)(de)診斷中，IGF-1的(de)(de)(de)檢(jian)(jian)測(ce)與(yu)隨機GH的(de)(de)(de)檢(jian)(jian)測(ce)相比，前者(zhe)更具(ju)有可靠(kao)性。

4、實驗原理

IGF-1 600ELISA試(shi)劑盒是一種(zhong)固相的酶聯免(mian)疫實驗(yan)，采(cai)用爭競法的原(yuan)理(li)(li)。實驗(yan)開始前將病(bing)人(ren)樣(yang)品(pin)(pin)、標(biao)準品(pin)(pin)和質控品(pin)(pin)先酸化和中(zhong)和好。包被(bei)板(ban)的微(wei)孔中(zhong)包被(bei)了(le)單克隆抗體，這種(zhong)單克隆抗體對(dui)IGF-1分子(zi)上的某單一抗原(yuan)位點具有特異性(xing)。將預先處理(li)(li)好的樣(yang)品(pin)(pin)與酶聯物(wu)（生物(wu).素標(biao)記(ji)的IGF-1）在(zai)室溫下溫育。之后洗板(ban)，再加(jia)入(ru)(ru)酶復合物(wu)（辣根過氧酶標(biao)記(ji)的鏈親和素）并溫育。加(jia)入(ru)(ru)底物(wu)溶液(ye)后，溶液(ye)所顯示(shi)的顏色強度(du)與病(bing)人(ren)樣(yang)品(pin)(pin)中(zhong)IGF-1的濃(nong)度(du)成反(fan)比。

5、成分

1. 1M的HCl ，1支，3ml，即用，用于樣品的酸化。

2. 1M的NaOH，1支，3ml，即用(yong)，用(yong)于(yu)中和。

3. 包(bao)被板，12×8（可拆），96孔，包(bao)被孔中包(bao)被了(le)抗(kang)IGF-1抗(kang)體（單抗(kang)）

4. 標(biao)準(zhun)品(pin)（標(biao)準(zhun)品(pin)0-6），7支，1ml，濃度(du)：0；5；10；50；150；300；600ng/ml。NIBSC編號(hao)：87/518，轉換系數：1ng/ml×0.13=nmol/l。內含0.03%的Proclin300和0.005%的慶.大霉素(su)硫酸鹽做為防腐劑(ji)。

5. 酶聯物(wu)，1支，14ml，即用，生物(wu).素標記IGF-1，內含0.01%的(de)甲基異噻唑酮，0.02%的(de)BND防腐劑。

6. 酶復合(he)物，1支，20ml，即用(yong)，HRP標記(ji)的鏈(lian)親和素(su)復合(he)物。

7. 底物(wu)液，1支(zhi)，14ml，即(ji)用(yong)，TMB

8. 終止液(ye)，1支，14ml，即用(yong)，內含0.5M的H2SO4。避免(mian)接觸終止液(ye)，以免(mian)著燒或刺激(ji)皮膚。

9. 洗(xi)滌液，1支，30ml（40倍濃縮）

注意：用于樣(yang)品稀(xi)釋的零標準品應視需(xu)要而定。

6、IGF-1試(shi)劑(ji)盒(he)實(shi)驗所(suo)需(xu)器材（但試(shi)劑(ji)盒(he)不提供）

1. 酶標儀

2. 移液器

3. 吸水紙

4. 蒸餾水

5. 1.5ml的反應杯(bei)（用(yong)于(yu)樣品的準備）

6. 通用的指示紙

7、IGF-1試劑盒的儲存與穩定性

  未開(kai)啟的(de)(de)試(shi)(shi)劑在2—8℃下(xia)貯存(cun)，在有效(xiao)期(qi)內(nei)可(ke)以保(bao)持活性(xing)。不要(yao)使用過期(qi)試(shi)(shi)劑。開(kai)封(feng)了的(de)(de)試(shi)(shi)劑必(bi)須(xu)(xu)儲存(cun)于2-8℃的(de)(de)環境下(xia)。微孔反應板也必(bi)須(xu)(xu)在2—8℃下(xia)貯存(cun)。一旦包(bao)裝袋(dai)被打開(kai)，必(bi)須(xu)(xu)將(jiang)它小心地嚴(yan)封(feng)起來。拆開(kai)包(bao)裝后，包(bao)被的(de)(de)微孔反應板的(de)(de)免(mian)疫活性(xing)可(ke)在約6周(zhou)內(nei)保(bao)持穩定，但必(bi)須(xu)(xu)密封(feng)在裝有干燥(zao)劑的(de)(de)袋(dai)子里(li)。

8、IGF-1試劑盒樣本

血(xue)(xue)清可(ke)以用于此(ci)實驗，注(zhu)意(yi)：據觀察，血(xue)(xue)漿中的IGF-1濃(nong)度明顯(xian)降低。切(qie)勿使用溶血(xue)(xue)、黃疸或脂血(xue)(xue)樣品(pin)。請注(zhu)意(yi)：含疊氮(dan)鈉的樣品(pin)不能用于此(ci)實驗。

8.1樣品的采集

血(xue)清：靜脈穿刺采集全(quan)血(xue)，待其凝血(xue)，室溫下離心(xin)獲取血(xue)清。在樣品未*凝結前請勿離心(xin)。接受(shou)了(le)抗凝血(xue)治(zhi)療病人的樣品可能需要更長的凝血(xue)時間。

8.2樣品的儲存：

樣品(pin)應當立(li)即檢測。如果實(shi)驗前想要(yao)將樣品(pin)存放更(geng)長的(de)時間，則應將樣品(pin)凍存于-20℃的(de)環(huan)境(jing)下。解凍的(de)樣品(pin)在實(shi)驗前應反復倒置幾次。

8.3樣品的稀釋：

在*實驗時(shi)，如果血清(qing)樣品中IGF-1的濃度(du)高于zui高標(biao)準(zhun)品中IGF-1的濃度(du)，則應(ying)將(jiang)(jiang)此樣品用零(ling)標(biao)準(zhun)品稀釋，并按(an)實驗步(bu)驟重新(xin)檢測。在計算濃度(du)時(shi)應(ying)當將(jiang)(jiang)此稀釋因子考(kao)慮進去。

例如：

• 按1：10的比例(li)稀釋：10μl的血清+90μl零標準品(pin)（充分混合）

• 按1：100的(de)比例稀釋：10μl已稀釋好的(de)a）+90μl零標準品（充分混合）

• 
  

9、病人樣品和標(biao)準品的酸化(hua)與中和

1. 在1.5ml的反應Caps中加入200μl樣品(pin)(pin)、標準品(pin)(pin)和質(zhi)控孔。請注意(yi)：按照下列所述步驟，標準品(pin)(pin)既要進(jin)行酸化，也要進(jin)行中和。

2. 在加入(ru)20μl 1M的HCl。

3. 混合并(bing)溫育15min。

4. 向(xiang)所有(you)的Caps中加(jia)入20μl 1M的NaOH進(jin)行中和，混(hun)合溶液。

5. 中和(he)之后(hou)的pH值應該是7到8之間，請用(yong)通用(yong)指(zhi)示紙檢測pH值。